En los últimos años Pichia pastoris ha destacado como un sistema de expresión de proteínas heterólogas, por lo que se ha vuelto necesario mejorar las condiciones de cultivo con el fin de incrementar la producción de proteínas de interés comercial. Actualmente se han propuesto estrategias como el aumento de la producción de biomasa como forma de incrementar la producción con P. pastoris, empleando sistemas de cultivo más económicos que el cultivo continuo. Por lo que en este trabajo, el principal objetivo fue la selección del sustrato idóneo que permitiera obtener la mejor producción de biomasa en EPU (Espuma de poliuretano) como soporte sólido, evaluándose el crecimiento mediante análisis fisiológicos, bioquímicos y de respiración. Debido a que la regulación del pH es uno de los principales problemas en medio sólido, se llevó cabo la modificación del medio de cultivo propuesto en trabajos anteriores (Núñez, 2012), para lo cual se probaron diferentes concentraciones de fosfato (50, 100 y 150mM) en matraz agitado a distintas relaciones carbono nitrógeno (C/N= 6.2 y 10), escogiéndose para la formulación del medio de cultivo la concentración de 150mM de fosfatos con una relación C/N=10, debido a que se mantuvo el valor de pH por encima del valor más bajo de crecimiento (pH 3) además de la disminución del tiempo de crecimiento a solo 48 horas de cultivo. Adicionalmente, se comparó el crecimiento en medio líquido utilizando glucosa y glicerol, obteniéndose un rendimiento 47 % mayor en los cultivos con glicerol comparado con los cultivos con glucosa (Yx/s= 0.3 gbiomasa/gsustrato), mientras que la tasa de crecimiento de los cultivos con glucosa fue de 46 % mayor a lo obtenido con glicerol (µm=0.12 h-1 ), sin embargo en ambos casos el máximo descenso del pH estuvo en el rango del valor óptimo de crecimiento (pH 3-7). Una vez establecida la formulación del medio de cultivo, se llevó a cabo la comparación de estos dos sustrato a diferentes concentraciones (S0 (g/L)= 50, 100 y 150), en medio sólido empleando reactores de columna empacados con placas de espuma de poliuretano (EPU) como soporte sólido, donde se inyectó un flujo de aire húmedo a 50mL/min. Al igual que los cultivos realizados en matraz agitado con glicerol y glucosa, en medio sólido se observaron importantes diferencias en el crecimiento de P. pastoris empleando estos dos sustratos. En los cultivos con glicerol la producción máxima de biomasa a concentraciones iniciales, S0 (g/L)= 50, 100 y 150 fueron 34, 58 y 54 % respectivamente mayores a lo obtenido con glucosa, por otro lado, en los cultivos con glucosa y glicerol las tasa de crecimiento a concentraciones 100 y 150 g/L de sustrato no presentaron diferencias significativa entre sí, mientras que en los cultivos con glucosa a concentración de 50 g/L la diferencia fue del 109% comparado con los cultivos con glicerol a la misma concentración, en contraste, los valores de µ calculados a partir de los datos de producción de CO2 y consumo de O2 fueron mayores a los obtenidos a partir de los datos de producción de biomasa. Por otro lado, el gasto derivado a energía de mantenimiento calculado a partir de los datos de sustrato y respiración mostraron que a concentraciones de 50 y 100 g/L de glicerol se encontró el mayor gasto de mantenimiento, mientras que en los cultivos con glucosa este gasto se observó a una concentración de 150 g/L de sustrato. Por otro lado, la respiración fue mayor en los cultivos con glucosa, así como el incremento de producción de CO2 cuando se aumentó la concentración inicial de sustrato, obteniéndose un máximo en la respiración de 61.11 mgCO2/gepu*h, con un consumo de O2 de 25.04 mg O2/gepu*h a concentración de 100 g/L de glucosa, por el contrario en los cultivos con glicerol los valores de respiración máxima, fueron descendiendo conforme la concentración se incrementó alcanzando un mínimo valor de Rm igual a 17.4 61.11 mgCO2/gepu*h con un consumo de O2 de 17.37 mg O2/gepu*h a una concentración de 150 g/L de glicerol. Por otro lado, conforme la concentración inicial de glicerol y glucosa se incrementó los valores de CR variaron de su valor teórico. En el caso de los cultivos con glicerol el valor del cociente respiratorio máximo, CRm, paso de 0.76 a 50 g/L de glicerol a 0.67 a concentración de 150 g/L, mientras que en los cultivos con glucosa el CRm varió su valor pasando de 1.58 a 50 g/L de glucosa a 1.43 a concentración de 150g/L. dichos cambios en el valor del CRm fueron asociados a la formación de metabolitos parcialmente oxidados. En el caso de los cultivos con glicerol estos productos fueron D- arabitol y ácido cítrico, mientras que en los cultivos con glucosa los principales compuestos fueron etanol, D-arabitol y ácido cítrico, a su vez la producción de estos compuestos se relacionó al incrementó de la concentración inicial. Por último la relación, entre el crecimiento y la respiración se observó mediante el análisis del punto de inflexión, en el caso de los cultivos con glicerol a concentración inicial, S0 (g/L)= 50, 100 y 150 en promedio fueron 20.52, 32.91, 55.20 horas respectivamente, mientras que en los cultivo con glucosa a las mismas concentraciones fueron 20.1, 24.63, 35.79 horas, indicando el tiempo que tardó P. pastoris de pasar de un metabolismo a otro en cada condición estudiada.
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