Análisis comparativo del secretoma de Aspergillus brasiliensis obtenido con diferentes concentraciones de glucosa en medio sólido 上市 Deposited
En este trabajo se compararon los secretomas producidos en fermentación sólida por Aspergillus brasiliensis ATCC9642, utilizando un medio de glucosa a tres concentraciones (30, 100 y 180 g/L) y agrolita, como soporte inerte. Para la obtención del secretoma, se definió un estado fisiológico, donde el hongo presentaba la tasa de producción de CO2 más alta, la cual fue determinada por respirometría. Posteriormente, las proteínas obtenidas fueron separadas por electroforesis (2D-PAGE y 1D-SDS-PAGE), las imágenes obtenidas por los geles 2D-PAGE se analizaron por el software PDQuest, identificando los spots considerados de buena calidad en cada gel, siendo éstos reproducibles entre réplicas y presentando un bajo coeficiente de variación. Se seleccionaron un total de 11 spots los cuales fueron digeridos con tripsina para la obtención de péptidos, separados por cromatografía líquida; y posteriormente, inyectados en un espectrómetro de masas (LC-MS/MS). El mismo proceso se realizó para las bandas del gel unidimensional. Los espectros de masas obtenidos se convirtieron en formato MZMXL y después a formato PKL para su posterior análisis por medio del algoritmo de Mascot, donde se utilizó una base de datos de las proteínas de Aspergillus brasiliensis, así obteniendo las secuencias FASTA. EL análisis bioinformático de las secuencias se realizó utilizando los siguientes algoritmos y bases de datos: BlastP, Secretome P, Signal P, TMHMM, Pfam, Uniprot y KEGG, para su caracterización y reconocimiento de sus posibles funciones. Se Identificaron 19 proteínas, de las cuales 6 se identificaron como extracelulares y 13 como intracelulares. Al analizar las funciones de las proteínas, se concluyó que la concentración de la glucosa y de los componentes del medio, influyó sobre el secretoma de A. brasiliensis ATCC9642, ya que se presentaron proteínas de choque térmico, respuesta a estrés osmótico, inhibición de proteínas de la glucólisis, mayor expresión de proteínas que participan en el crecimiento microbiano y enzimas que actúan sobre estrés oxidativo. Además el aumento de la concentración de glucosa influye en la producción total de proteína secretada, así como en la biomasa final.
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