Inhibición de la unión in vitro de espermatozoides a la zona pelúcida de ovocitos de cerdo por una proteína espermática de 55 kDa Public Deposited
En un trabajo previo (Zayas y cols., 19951, se ha mostrado evidencia de afinidad entre la proteína denominada ZP3 (ZP3-a + ZP3-p) de ovocitos de cerdo con una proteína de 55 kDa de espermatozoides de la misma especie por medio de Western-blot. El objetivo del presente trabajo fue estudiar la funci6n biológica de esta proteína durante la unión ovocito-espermatozoide, así como como su localizaci6n in situ. Los ovocitos se maduraron durante 48 h. Los espermatozoides, se dividieron en dos porciones; la primera se us6 para obtener un extracto de proteínas del que se aisló y purificó la proteína de 55kDa. La otra porci6n se capacitó para los subsecuentes ensayos de inhibición de la uni6n e inmunolocalización. De la proteína purificada, una parte se destinó para la producción de anticuerpos contra Basta. Para estudiar la función de la proteína espermática como receptor, se incubaron a los ovocitos maduros, con la proteína de 55 kDa durante 1 h, se lavaron y se incubaron nuevamente en presencia de lx105 espermatozoides capacitados. En otro experimento, los espermatozoides capacitados se incubaron en presencia de anticuerpos contra la proteína espermática durante 1 h, se lavaron y se incubaron con ovocitos madurados. Para la inmunolocalizaci6n, se trabajó con espermatozoides capacitados, y a una parte de ellos se les indujo la reacción acrosomal. Los espermatozoides capacitados y reaccionados se incubaron de manera independiente con anticuerpos contra la proteína espermática durante 12 h, después de tres lavados se incubaron con un segundo anticuerpo conjugado con fluoresceína, se lavaron nuevamente y se observaron bajo un microscopio de epifluorescencia. Los resultados mostraron que hay correlación entre la concentración de la proteína y el porcentaje de bloqueo de la unión, siendo la máxima la de 50 ug/ml al lograr inhibir en un 100 %. AI utilizar el anticuerpo anti-55kDa en una dilución 1 :100, también se inhibió la uni6n totalmente, En los ensayos de inmunolocalización con anticuerpos producidos en el laboratorio, cuando los espermatozoides han pasado solamente por el período de capacitación, sitúan a la proteína en la cabeza del espermatozoide de manera homogénea, preferentemente localizada en la parte apical, mientras que cuando el espermatozoide ha sufrido la reacción acrosomal, este borde desaparece manteniéndose la fluorescencia homogénea en toda la cabeza. Estos resultados indican que existe una especificidad en la unión de la proteína de 55 kDa del espermatozoide con la ZP de ovocitos, por lo que ésta puede ser la responsable de la unión primaria de los gametos durante la fertilización.
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