The implementation of a method for simultaneous detection of four pathogenic agents is of great importance, because a reduction of costs and time as well as the ability to detec simultaneously four pathogens in a sample. The implementation of multiplex PCR using the SYBRGreen method was performed taking into account the pathogens related food diseases. The Pathogens considered dangerous, are E. coli producing Shigatoxin, Salmonella enterica subsp enterica, Shigella spp and Listeria monocytogenes, they have been reported cases outbreaks severe diarrheal diseases worldwide, that are a public health problem, affecting developing countries, the damage caused by these pathogens, we have the following cases; E. coli producing Shigatoxin, which can cause gastroenteritis, hemorrhagic colitis, hemolytic-uremic syndrome and cause of kidney failure in children, Salmonella enterica, pathogen that infects millions of people each year, which cause discomfort , hospitalizations and deaths, another disease that has generated great controversy is listeriosis caused by Listeria monocytogenes or Listeria ivanovii, which each year have been reported over 1500 cases of listeriosis, caused mostly by eating raw food and the last case of importance of this work we have Shigella spp., that regularly is transmitted by consumption of water and raw food and is related by unhygienic people. In this paper, we implemented a method able to detect in a first stage to E. coli-Shigella, Salmonella spp, and Listeria monocytogenes, and in a second step, determine the shiga toxins of E. coli and discriminate Shigella of E. coli, however, the validation of the method was performed in order to demonstrate the functionality thereof by a series of tests . This paper implemented, validated and optimized time and reagents for the simultaneous detection of four pathogens in the building of “Universidad Politécnica del Estado de Morelos”.
La implementación de un método para la detección simultanea de cuatro agentes patogénicos es de gran importancia, ya que se logra una reducción de costos y de tiempo, así como la posibilidad de encontrar simultáneamente a cuatro patógenos en una muestra. La implementación de la PCR multiplex utilizando el método SYBRGreen, fue realizada tomando en cuenta a los patógenos relacionados con enfermedades transmitidas por alimentos (ETAs). Entre los patógenos considerados peligrosos, se encuentran E. coli productora de las toxinas Shiga, Salmonella entérica subsp. entérica, Shigella spp. y Listeria monocytogenes, de los cuales se han reportados brotes a nivel mundial causando enfermedades diarreicas severas, enfermedades que son un problema en salud pública, afectando a los países en desarrollo, los padecimientos causados por estos patógenos, se tienen los siguientes casos; E. coli productora de shigatoxinas, la cual puede causar gastroenteritis que puede complicarse a colitis hemorrágica o el síndrome hemolítico- urémico, causa de insuficiencia renal en los niños, Salmonella entérica, patógeno que infecta a millones de personas cada año, la cual causa malestares, hospitalizaciones y muertes, otra enfermedad que ha generado gran polémica es listeriosis, causada por Listeria monocytogenes o Listeria ivanovii, de la cual cada año se han reportado alrededor de 1500 casos de listeriosis, causada casi siempre por consumo de alimentos crudos y el último caso de importancia para este trabajo tenemos a Shigella spp., causa shigelosis, regularmente es transmitida por consumo de agua y alimentos crudos y está relacionada por la falta de higiene de las personas. Se desarrolló un método capaz de detectar en una primera etapa a E. coli - Shigella, Salmonella spp. y Listeria monocytogenes, y en una segunda etapa, determinar las toxinas shiga de E. coli y discriminar a Shigella de E. coli no obstante, se realizó la validación del método con la finalidad de demostrar la funcionalidad del mismo mediante una serie de pruebas. El presente trabajo implementó, validó y optimizó tiempos y reactivos para la detección simultanea de cuatro patógenos en las instalaciones de la Universidad Politécnica del Estado de Morelos.
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